第三章：實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的應(yīng)用

一、相對定量

測定不同樣品中基因表達(dá)量的相對值。

內(nèi)參基因的選擇

(1)始終選擇表達(dá)充沛、均一的基因做為內(nèi)參基因；

(2)不要盲目選擇常用的內(nèi)參基因；

(3)常用內(nèi)參基因：GAPDH，Actin，Tublin。

內(nèi)參基因的選擇至關(guān)重要，決定結(jié)果的有效性

加入內(nèi)參基因后：

結(jié)果計(jì)算

二、絕對定量

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品，測定樣品中基因表達(dá)量的絕對值 ( 拷貝數(shù) )。

標(biāo)準(zhǔn)品：具有明確拷貝數(shù)濃度的樣品

A/ 克隆質(zhì)粒 B/ PCR 產(chǎn)物 C/ cDNA ( 擴(kuò)增效率測定等用途可以使用，絕對定量不能使用 )

拷貝數(shù)計(jì)算

平均分子量（MW）:

dsDNA=( 堿基數(shù) ) x (660 道爾頓 / 堿基 )

ssDNA=( 堿基數(shù) ) x (330 道爾頓 / 堿基 )

ssRNA=( 堿基數(shù) ) x (340 道爾頓 / 堿基 )

拷貝數(shù)計(jì)算公式 : (6.02 x 1023 拷貝數(shù) / 摩爾 ) x ( 濃度 g/ml) / (MW g/mol) = copies/ml

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)?？梢栽诘谝粫r(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)